produkty

Účinky detergentů na aktivitu P-glykoprotein atpázy: rozdíly v poruchách bazálních a verapamil-dependentních aktivit.

P-glykoprotein (P-gp), glykoprotein plazmatické membrány spojený s fenotypem mnohočetné lékové rezistence, je zodpovědný za ATP-dependentní eflux různých amfifilních léků.Pomocí membránových vezikul připravených z multirezistentní buněčné linie DC-3F/ADX jsme studovali poruchu bazálních (tj. v nepřítomnosti léčiva) a verapamil-dependentních P-gp ATPázových aktivit indukovaných různými detergenty při nesolubilizačním, stejně jako při solubilizačních koncentracích.Progresivní membránová solubilizace se zvyšující se koncentrací detergentu byla sledována pomocí rozptylu světla a centrifugačních experimentů.Pro koncentrace nerozpustných detergentů všechny testované detergenty kromě DOC indukovaly částečnou inhibici aktivity P-gp ATPázy, která nekorelovala s množstvím různých testovaných detergentů začleněných do membrán.Analýza aktivace P-gp indukované verapamilem ukazuje, že aktivita P-gp ATPázy je různě modulována různými detergenty v nesolubilizujících koncentracích.Je tedy pravděpodobnější, že dojde spíše ke specifickým interakcím mezi P-gp a detergenty než ke globálnímu narušení membrány.Po solubilizaci různými testovanými detergenty byla bazální aktivita P-gp ATPázy prakticky úplně inhibována, s výjimkou přítomnosti CHAPS, který byl schopen zachovat tuto aktivitu na úrovni srovnatelné s hladinou naměřenou v nativních membránách.Verapamilem indukovaná aktivace P-gp ATPázy se však ztratila během solubilizace P-gp pomocí CHAPS, ale obnovila se po zředění CHAPS pod jeho kritickou micelární koncentraci.Tato pozorování naznačují specifické interakce mezi molekulami P-gp a CHAPS v rámci smíšených micel.Celkově jsou naše data prokazující specifické interakce P-gp/detergenty v souladu s umístěním míst transportu léčiv na transmembránových doménách P-gp.