produkty

Podobně jako jiné RNA viry s pozitivním vláknem jsou tombusviry replikovány komplexem virové replikázy vázaným na membránu (VRC).VRC se skládá z virem p92 kódované RNA-dependentní RNA polymerázy (RdRp), virového p33 RNA chaperonu a několika kooptovaných hostitelských proteinů.Aby se po translaci stal funkčním RdRp, měl by být replikační protein p92 začleněn do VRC a následně by měl následovat jeho aktivace.Již dříve jsme v testu založeném na bezbuněčném kvasinkovém extraktu ukázali, že aktivace Tomato bushy stunt virus (TBSV) RdRp vyžaduje rozpustný hostitelský faktor (faktory).V tomto článku identifikujeme buněčný protein tepelného šoku 70 (Hsp70) jako kooptovaný hostitelský faktor potřebný pro aktivaci N-koncově zkráceného rekombinantního TBSV RdRp.Kromě toho blokování funkce Hsp70 na bázi malých molekul inhibuje syntézu RNA tombusvirem RdRp in vitro.Dále jsme ukázali, že neutrální fosfolipidy, jmenovitě fosfatidylethanolamin (PE) a fosfatidylcholin (PC ), zvyšují aktivaci RdRp in vitro.Naproti tomu fosfatidylglycerol (PG) vykazuje silný a dominantní inhibiční účinek na aktivaci RdRp in vitro.Také jsme ukázali, že PE a PC stimulují interakci RdRp-virová plus-vláknová RNA [(+)RNA], zatímco PG inhibuje vazbu virové RNA na RdRp.Na základě stimulační versus inhibiční role různých fosfolipidů při aktivaci RdRp tombusviru navrhujeme, že lipidové složení cílených subcelulárních membrán by mohly tombusviry využít k regulaci nového sestavení VRC v průběhu infekce. RNA polymeráza závislá na viru (RdRp), který je zodpovědný za syntézu potomstva virové RNA v infikovaných buňkách několika virů RNA s pozitivním řetězcem, je zpočátku neaktivní.Tato strategie pravděpodobně zabrání syntéze virové RNA v cytosolu, která by rychle vedla k indukci RNA-spouštěných buněčných antivirových odpovědí.Během sestavování komplexu replikázy vázaného na membránu se virový RdRp aktivuje prostřednictvím neúplně pochopeného procesu, který činí RdRp schopným syntézy RNA.Pomocí TBSV RdRp jsme ukázali, že kooptovaný buněčný chaperon Hsp70 a neutrální fosfolipidy usnadňují aktivaci RdRp in vitro.Naproti tomu fosfatidylglycerol (PG) má dominantní inhibiční účinek na aktivaci RdRp in vitro a interakci RdRp-virová RNA, což naznačuje, že membránová mikrodoména obklopující RdRp značně ovlivňuje jeho schopnost syntézy RNA.Aktivace virového RdRp tedy pravděpodobně závisí na více složkách hostitele v infikovaných buňkách.