L-Proline Cas: 147-85-3 99% Bílý prášek
| Katalogové číslo | XD90293 |
| jméno výrobku | L-prolin |
| CAS | 147-85-3 |
| Molekulární vzorec | C5H9NO2 |
| Molekulární váha | 115,13046 |
| Podrobnosti o úložišti | Okolní |
| Harmonizovaný celní kód | 29339980 |
Specifikace produktu
| Zkouška | 99 % min |
| Vzhled | bílý prášek |
| Specifická rotace | -84,5 až -86 |
| Těžké kovy | <15 str./min |
| AS | <1 ppm |
| Ph | 5,9 - 6,9 |
| SO4 | <0,050 % |
| Fe | <30 str./min |
| Ztráta sušením | <0,3 % |
| Zbytek po zapálení | <0,10 % |
| NH4 | <0,02 % |
| Cl | <0,050 % |
| Stav řešení | >98 % |
Pochopení metabolismu mikrobiálního hostitele je zásadní pro vývoj a optimalizaci biokatalytických procesů založených na celých buňkách, protože určuje efektivitu produkce.To platí zejména pro redoxní biokatalýzu, kde se používají metabolicky aktivní buňky kvůli regenerační kapacitě kofaktor/kosubstrát endogenní v hostiteli.Rekombinantní Escherichia coli byla použita pro nadprodukci prolin-4-hydroxylázy (P4H), dioxygenázy katalyzující hydroxylaci volného L-prolinu na trans-4-hydroxy-L-prolin s a-ketoglutarátem (a-KG) jako kosubstrátem.V tomto celobuněčném biokatalyzátoru poskytuje centrální metabolismus uhlíku požadovaný kosubstrát a-KG, který spojuje biokatalytický výkon P4H přímo s metabolismem uhlíku a metabolickou aktivitou.Aplikací nástrojů experimentální i výpočetní biologie, jako je metabolické inženýrství a analýza (13)C-metabolického toku ((13)C-MFA), jsme zkoumali a kvantitativně popsali fyziologickou, metabolickou a bioenergetickou odezvu celobuněčného biokatalyzátoru. K cílené biokonverzi a identifikoval možná metabolická úzká hrdla pro další inženýrství racionální dráhy. Kmen E. coli s deficitem degradace prolinu byl zkonstruován delecí putA genu kódujícího prolindehydrogenázu.Celobuněčné biotransformace s tímto mutantním kmenem vedly nejen ke kvantitativní hydroxylaci prolinu, ale také ke zdvojnásobení specifické rychlosti tvorby trans-4-L-hydroxyprolinu (hyp) ve srovnání s divokým typem.Analýza toku uhlíku centrálním metabolismem mutantního kmene odhalila, že zvýšený požadavek na a-KG po aktivitě P4H nezvýšil tok generující a-KG, což ukazuje na přísně regulovaný provoz cyklu TCA za studovaných podmínek.U kmene divokého typu způsobila syntéza a katalýza P4H snížení výtěžku biomasy.Je zajímavé, že kmen ΔputA navíc kompenzoval související ztráty ATP a NADH snížením energetických nároků na údržbu při srovnatelně nízkých rychlostech absorpce glukózy, namísto zvýšení aktivity TCA. Bylo zjištěno, že knokaut putA v rekombinantní E. coli BL21(DE3)(pLysS) být slibný pro produktivní katalýzu P4H nejen z hlediska výtěžku biotransformace, ale také pokud jde o rychlost biotransformace a absorpce prolinu a výtěžek hyp na zdroji energie.Výsledky naznačují, že po knockoutu putA se spojení TCA-cyklu s hydroxylací prolinu prostřednictvím kosubstrátu a-KG stává klíčovým faktorem omezujícím a cílem pro další zlepšení účinnosti biotransformací závislých na a-KG.
