produkty

V poslední době se často objevují otázky: 1. Proč lze test ONPG použít k rozlišení opožděné fermentace laktózy?2. Proč národní norma uvádí, že pro ONPG test je nutné použít 3% chlorid sodný trisacharid železo (nebo trisacharid železo)?3. Proč by se měl při provádění OPNG testu pro Vibrio parahaemolyticus přidávat toluen podle normy po kapkách?Jaká je funkce?

Naše společnost zkontrolovala mnoho informací, shrnula je a sdílela je s vámi níže:

Princip: Čínský název ONPG je o-nitrobenzen-β-D-galaktopyranosid.ONPG může být hydrolyzován na galaktózu a žlutý o-nitrofenol (ONP) pomocí β-galaktosidázy, takže aktivitu β-galaktosidázy lze detekovat změnou barvy kultivačního média.

Laktóza je cukr, který většina mikroorganismů potřebuje detekovat.Jeho metabolismus vyžaduje dva enzymy, jedním je buněčná permeáza, laktóza vstupuje do buněk působením permeázy;druhá je β-galaktosidáza, která hydrolyzuje laktózu na galaktózu.Laktóza a glukóza.β-galaktosidáza může také přímo působit na ONPG a hydrolyzovat jej na galaktózu a žlutý o-nitrofenol (ONP).Lze to provést za 24 hodin, a to i u fermentorů se zpožděným laktózou.Proto vysvětluje výsledky pozorování odebrání kultury 1 ze šikmého agaru a její naočkování v celém kruhu při 36 °C po dobu 1-3 hodin a 24 hodin.Pokud je produkována β-galaktosidáza, zežloutne za 1-3 hodiny, pokud takový enzym není, nezmění barvu do 24 hodin.

Podle výše uvedených dvou enzymů lze mikroorganismy rozdělit do následujících kategorií:

1 laktózu fermentující (18-24 hodin) bakterie s permeázou a β-galaktosidázou P + G +;

2 Zpožděné fermentory laktózy (trvající déle než 24 hodin) bez permeázy, ale obsahující galaktozidázu: P-G+.

3 Nelaktózové fermentory bez permeázy i galaktosidázy: P-G-.

Test ONPG lze použít k rozlišení bakterií fermentujících laktózu (P-G+) od nefermentujících bakterií laktózy (PG-), jako jsou:

1 Odlišení pozdních fermentorů laktózy (P-G+) od fermentorů bez laktózy (P-G-).

a) Citrobacter (+) a Salmonella arizonae (+) ze Salmonella (-).

(b) Escherichia coli (+) z Shigella sonnei (-).

Proč byl test ONPG proveden pomocí kultivace přes noc na 3% chloridu sodném a železitém trisacharidu (trisacharid železa)?Naše společnost zkonzultovala spoustu informací, ale jednoznačné vyjádření neexistuje.Pouze na webových stránkách FDA je napsáno, že "Inokulujte kultury, které mají být testovány, na šikmé trojité cukrové železné agary a inkubujte po dobu 18 hodin při 37 °C (nebo jiné vhodné teplotě, je-li požadováno). Živné (nebo jiné) šikmé agary obsahující 1,0 % laktózy lze také použít."znamená: testované bakterie byly naočkovány na médium s trisacharidem železa a kultivovány při 37 °C po dobu 18 hodin.Živné agarové šikmé (nebo jiné) médium obsahující 1 % laktózy je také přijatelné.Proto se usuzuje, že médium obsahující trisacharid železo obsahuje laktózu.Po růstu přes noc bakterie produkovaly dobře aktivní β-galaktosidázu.Pomocí takových bakterií lze ONPG rychleji rozložit β-galaktosidázou.Experimentální jev se rychleji a lépe projevuje.Kromě toho se přidává po kapkách toluen a vodní lázeň po dobu 5 minut, aby se plně uvolnila β-galaktosidáza.