produkty

Více než 70 % gliomů nízkého stupně nese heterozygotní mutaci R132H v genu kódujícím isocitrátdehydrogenázu 1 (IDH1).To propůjčuje enzymu novou schopnost převádět α-ketoglutarát na 2-hydroxyglutarát, což nakonec vede k tumorigenezi.Hlavním zdrojem produkce 2-hydroxyglutarátu je glutamin, který je u rakoviny také zdrojem anaplerózy cyklu trikarboxylových kyselin (TCA).Alternativním zdrojem anaplerosy je tok pyruvátu prostřednictvím pyruvátkarboxylázy (PC), což je běžná cesta v normálních astrocytech.Cílem této studie bylo zjistit, zda PC slouží jako zdroj anaplerózy TCA v buňkách mutantů IDH1, kde se glutamin používá k produkci 2-hydroxyglutarátu. Byly zkoumány imortalizované normální lidské astrocyty upravené tak, aby exprimovaly heterozygotní mutantní IDH1 nebo IDH1 divokého typu.Tok pyruvátu přes PC a přes pyruvátdehydrogenázu (PDH) byl stanoven pomocí magnetické rezonanční spektroskopie pro sondování značení 13C-značeného glutamátu a glutaminu odvozeného od [2-13C]glukózy.K testování exprese a aktivity relevantních enzymů byly použity testy aktivity, RT-PCR a western blotting.Data Cancer Genome Atlas (TCGA) byla analyzována za účelem posouzení exprese enzymů ve vzorcích lidského gliomu. Ve srovnání s buňkami divokého typu mutantní buňky IDH1 významně zvýšily frakční tok přes PC.To bylo spojeno s významným zvýšením aktivity a exprese PC.Současně se významně snížila aktivita PDH, pravděpodobně zprostředkovaná významně zvýšenou inhibiční fosforylací PDH PDH kinázou 3. V souladu s pozorováním v buňkách analýza dat TCGA ukázala významné zvýšení exprese PC ve vzorcích lidského gliomu exprimujícího mutantní IDH ve srovnání s divokými typu IDH. Naše zjištění naznačují, že změny v PC a PDH mohou být důležitou součástí buněčné adaptace na mutaci IDH1 a mohou sloužit jako potenciální terapeutické cíle.