produkty

Oxidační poškození bází DNA obvykle vede k tvorbě oxidovaných purinů, zejména 7,8-dihydro-8-oxoguaninu (8-oxoG) a 7,8-dihydro-8-oxoadeninu (8-oxoA), přičemž první z nich je dobře známá mutagenní léze.Protože 8-oxoG ve srovnání s normálními bázemi snadno podléhá další oxidaci, byla in vitro zkoumána inzerce báze během syntézy DNA naproti oxidované formě 8-oxoG.Syntetický templát obsahující jednu lézi 8-oxoG byl nejprve ošetřen různými jednoelektronovými oxidanty nebo za podmínek singletového kyslíku a poté podroben extenzi primeru katalyzované exo- (Kf exo-), DNA polymerázou alfa telecího brzlíku (pol alfa ) nebo lidská DNA polymeráza beta (pol beta).V souladu s předchozími zprávami jsou dAMP a dCMP vloženy selektivně naproti 8-oxoG se všemi třemi DNA polymerázami.Je zajímavé, že bylo zjištěno, že oxidace 8-oxoG indukuje inzerci dAMP a dGMP naproti lézi působením Kf exo- s přechodnou inhibicí extenze primeru vyskytující se v místě modifikované báze.Kromě toho léze představuje blok během syntézy DNA pomocí pol alfa a pol beta.Experimenty s 8-oxoA-modifikovaným templátovým oligonukleotidem ukazují, že jak 8-oxoA, tak oxidovaná forma 8-oxoA přímá inzerce dTMP pomocí Kf exo-.Hmotnostní spektrometrické analýzy oligonukleotidů obsahujících 8-oxoG před a po oxidaci IrCl62 jsou konzistentní s oxidací primárně místa 8-oxoG, což vede k vytvoření guanidinohydantoinové skupiny jako hlavního produktu.Nebyly získány žádné důkazy o tvorbě abazických míst.Tyto výsledky ukazují, že oxidovaná forma 8-oxoG, možná guanidinohydantoin, může řídit chybné čtení a chybné vkládání dNTP během syntézy DNA.Pokud by k takovému procesu došlo in vivo, představovalo by to bodovou mutagenní lézi vedoucí k G-->T a G-->C transverzím.Odpovídající oxidovaná forma 8-oxoA však primárně vykazuje správnou inzerci T během syntézy DNA s Kf exo-.