produkty

Protein ORF45 herpesviru spojeného s Kaposiho sarkomem (KSHV) je gamaherpesvirový specifický protein bezprostředního raného tegumentu.Naše předchozí studie odhalily jeho zásadní roli v časných i pozdních fázích infekce KSHV.V této studii jsme zkoumali interaktom ORF45 pomocí panelu monoklonálních protilátek.Kromě dříve identifikovaných proteinů extracelulárně regulované kinázy (ERK) a p90 ribozomální S6 kinázy (RSK) jsme našli několik dalších kopurifikovaných proteinů, včetně prominentních proteinů o ~38 kDa a ~130 kDa.Hmotnostní spektrometrie odhalila, že 38-kDa protein je virový ORF33 a 130-kDa protein je buněčný USP7 (ubiquitin-specifická proteáza 7).Mapovali jsme doménu vázající ORF33 na vysoce konzervovaných 19 aminokyselin s karboxylovým koncem (aa) ORF45 a doménu vázající USP7 k uvedenému konsenzuálnímu motivu v centrální oblasti ORF45.Pomocí imunofluorescenčního barvení jsme pozorovali kolokalizaci ORF45 s ORF33 nebo USP7 jak za podmínek transfekce, tak v buňkách infikovaných KSHV.Navíc jsme zaznamenali na ORF45 závislou relokalizaci části ORF33/USP7 z jádra do cytoplazmy.Zjistili jsme, že ORF45 způsobil zvýšení akumulace proteinu ORF33, které bylo zrušeno, pokud byla deletována buď doména vázající ORF33 nebo USP7 v ORF45.Kromě toho delece konzervovaného karboxylového konce ORF45 v genomu KSHV drasticky snížila hladinu proteinu ORF33 v buňkách infikovaných KSHV a zrušila produkci virionů potomstva.Souhrnně naše výsledky nejen odhalují nové složky interaktomu ORF45, ale také ukazují, že interakce mezi těmito proteiny jsou klíčové pro lytickou replikaci KSHV. Herpesvirus spojený s Kaposiho sarkomem (KSHV) je původcem několika lidských rakovin.KSHV ORF45 je multifunkční protein, který je nutný pro lytickou replikaci KSHV, ale přesné mechanismy, kterými ORF45 vykonává své kritické funkce, nejsou jasné.Naše předchozí studie odhalily, že veškerý protein ORF45 v buňkách existuje v komplexech s vysokou molekulovou hmotností.Snažili jsme se proto charakterizovat interaktom ORF45, abychom poskytli pohled na jeho role během lytické replikace.Pomocí panelu monoklonálních protilátek jsme zkoumali interaktom ORF45 v buňkách infikovaných KSHV.Identifikovali jsme dva nové vazebné partnery ORF45: virový protein ORF33 a buněčnou proteázu 7 specifickou pro ubikvitin (USP7).Dále prokazujeme, že interakce mezi ORF45 a ORF33 je zásadní pro účinnou produkci virových částic KSHV, což naznačuje, že cílená interference s touto interakcí může představovat novou strategii inhibice lytické replikace KSHV.