produkty

Jedním z faktorů bránících klinické aplikaci regenerativní medicíny u degenerativních onemocnění chrupavky je vhodný zdroj buněk.Chondrocyty, jediný buněčný typ chrupavky, pěstované in vitro za kultivačních podmínek, aby se zvýšil počet buněk, ztrácejí svůj fenotyp spolu se schopností vytvářet hyalinní chrupavčitou tkáň.V této studii určujeme, že trojrozměrný (3D) kultivační systém bez séra a růstových faktorů obnovuje schopnost pasážovaných chondrocytů tvořit chrupavkovou tkáň in vitro, což je proces, který zahrnuje sox9. Bovinní kloubní chondrocyty byly pasážovány dvakrát do umožňují expanzi počtu buněk (P2) a kultivují se ve vysoké hustotě na 3D membránách potažených kolagenem typu II v médiu s vysokým obsahem glukózy doplněným inzulínem a dexamethasonem (SF3D).Buňky byly charakterizovány po expanzi monovrstvy a po 3D kultivaci průtokovou cytometrií, genovou expresí a histologií.Byly charakterizovány rané změny v signálních transdukčních drahách během rediferenciace iontu. P2 buňky vykazovaly profil antigenu podobný progenitoru 99 % CD44(+) a 40 % CD105(+) a profil genové exprese naznačující interzónové buňky.P2 v SF3D exprimoval chondrogenní geny a akumuloval extracelulární matrix.Downregulace inzulínového receptoru (IR) pomocí HNMPA-(AM3) nebo PI-3/AKT kinázové dráhy (aktivované léčbou inzulínem) pomocí Wortmanninu inhibovala syntézu kolagenu.HNMPA-(AM3) redukovala expresi Col2, Col11 a IR genů, stejně jako Sox6 a -9.Koimunoprecipitační a chromatinové imunoprecipitační analýzy buněk ošetřených HNMPA-(AM3) ukázaly vazbu koaktivátorů Sox6 a Med12 se Sox9, ale snížily vazbu Sox9-Col2a1. Popisujeme novou kultivační metodu, která umožňuje zvýšení počtu chondrocytů a podporuje tvorba hyalinní chrupavkové tkáně zčásti inzulínem zprostředkovanou vazbou Sox9-Col2a1.Vhodnost tkáně vytvořené tímto přístupem pro použití při opravě kloubů je třeba prozkoumat in vivo.