produkty

Jaderná akumulace mutantní formy jaderného proteinu Lamin-A, zvaného Progerin (PG) nebo Lamin AΔ50, se vyskytuje u Hutchinson-Gilfordova syndromu progerie (HGPS) nebo progerie, onemocnění zrychleného stárnutí.Jedním z hlavních příznaků této genetické poruchy je ztráta podkožního tuku v důsledku dramatické lipodystrofie. Stabilně jsme indukovali expresi lidského PG a GFP - zeleného fluorescenčního proteinu - jako kontrolu v buňkách 3T3L1 pomocí lentivirového systému ke studiu vliv exprese PG na diferenciační kapacitu této buněčné linie, jednoho z nejpoužívanějších adipogenních modelů.Ke studiu účinku akumulace PG byla provedena kvantitativní proteomika (iTRAQ).Několik modulovaných proteinů bylo ověřeno imunoblotováním a PCR v reálném čase.Mitochondriální funkce byla analyzována měřením a) mitochondriální bazální aktivity, b) produkce superoxidových aniontů a c) individuální účinnosti různých komplexů dýchacího řetězce. Zjistili jsme, že nadměrná exprese PG dodáním lentivirového genu vede k snížení rychlosti proliferace a defektů adipogenní kapacity ve srovnání s kontrolou.Kvantitativní proteomická analýza ukázala 181 proteinů významně (p<0,05) modulovaných v preadipocytech exprimujících PG.V buňkách exprimujících PG je narušena mitochondriální funkce.Konkrétně jsme detekovali zvýšení aktivity komplexu I a nadprodukci superoxidového aniontu.Inkubace s vychytávači reaktivních druhů kyslíku (ROS) vede ke snížení autofagické proteolýzy, jak se ukazuje poměrem LC3-II/LC3-I. Exprese PG v buňkách 3T3L1 podporuje změny v několika biologických procesech, včetně struktury cytoskeletu, metabolismu lipidů, vápníku regulace, translace, skládání proteinů a tvorba energie mitochondriemi.Naše data posilují příspěvek akumulace ROS k fenotypu předčasného stárnutí a prokazují spojení mezi mitochondriální dysfunkcí a ztrátou proteostázy u HGPS.