produkty

LecA (PA-IL) je cytotoxický lektin a adhesin produkovaný Pseudomonas aeruginosa, který váže hydrofobní galaktosidy s vysokou specificitou a afinitou.Použitím translační fúze lecA-egfp a imunoblotové analýzy extracelulární matrice biofilmu ukazujeme, že lecA je exprimován v buňkách pěstovaných na biofilmu.Ve statických testech biofilmu na polystyrenu i nerezové oceli byla hloubka biofilmu a pokrytí povrchu snížena mutací lecA a zvýšena u kmene PAO-P47 nadprodukujícího LecA.Pokrytí povrchu biofilmem původním kmenem PAO-P47, ale nikoli mutantem lecA na ocelových kuponech, bylo také inhibováno růstem v přítomnosti buď isopropyl-beta-D-thiogalaktosidu (IPTG) nebo p-nitrofenyl-alfa-D-galaktosidu ( NPG).Navíc zralé biofilmy divokého typu vytvořené v nepřítomnosti těchto hydrofobních galaktosidů by mohly být dispergovány přidáním IPTG.Naproti tomu přídavek p-nitrofenyl-alfa-L-fukózy (NPF), který má vysokou afinitu k lektinu P. aeruginosa LecB (PA-IIL), neměl žádný vliv na tvorbu biofilmu nebo jeho rozptyl.Planktonický růst P. aeruginosa PAO1 nebyl ovlivněn přítomností IPTG, NPG nebo NPF, ani nebyl kmen schopen využít tyto cukry jako zdroje uhlíku, což naznačuje, že pozorované účinky na tvorbu biofilmu byly způsobeny kompetitivní inhibicí LecA-ligandu. vazba.Podobné výsledky byly také získány pro biofilmy pěstované za podmínek dynamického toku na ocelových kuponech, což naznačuje, že LecA přispívá k architektuře biofilmu P. aeruginosa za různých podmínek prostředí.

V listech rostlin Arabidopsis byla detekována alfa-L-fukosidáza (EC 3.2.1.51) schopná uvolnit t-fukosylový zbytek z postranního řetězce xyloglukanových oligosacharidů.Kromě toho byla z listů kapusty (Brassica oleracea) purifikována alfa-L-fukosidáza s podobnou substrátovou specifitou, aby se vytvořil jediný pás na SDS-PAGE.Z tohoto proteinového pásu byly získány dvě peptidové sekvence a byly použity k identifikaci genu Arabidopsis kódujícího alfa-fukosidázu, kterou navrhujeme nazvat AtFXG1.Kromě toho byl také nalezen gen Arabidopsis s homologií se známými alfa-L-fukosidázami a navrhli jsme jej pojmenovat AtFUC1.Jak AtFXG1, tak ATFUC1 byly heterologně exprimovány v buňkách Pichia pastoris a aktivity alfa-L-fukosidázy sekretované do kultivačního média.Alfa-L-fukosidáza kódovaná AtFXG1 byla účinná proti oligosacharidům z xyloglukanu XXFG a také proti 2'-fukosyl-laktitolu, ale ne proti p-nitrofenyl-alfa-L-fukopyranosidu.Heterologicky exprimovaný AtFUC1 byl však aktivní pouze proti 2'-fukosyl-laktitolu.První z nich tedy musí souviset s metabolismem xyloglukanu.