produkty

V progresi Gravesovy orbitopatie (GO) byla prokázána diferenciace orbitálních fibroblastů na zralé adipocyty a následná akumulace tukové tkáně.Autofagie se podílí na adipogenezi, ale o úloze autofagie v iniciaci a progresi GO je známo jen málo.Cílem této studie je prozkoumat roli autofagie v patogenezi GO. Byly analyzovány explantáty orbitální tukové/pojivové tkáně od pacientů s GO a od normálních subjektů, stejně jako izolované orbitální fibroblasty.Adipogeneze byla indukována pomocí diferenciačního média s peroxidem vodíku nebo bez něj a autofagie byla manipulována pomocí bafilomycinu A1 a krátké vlásenkové RNA (shRNA) cílené na Atg5.Autofagozomy byly identifikovány elektronovou mikroskopií.Exprese genů souvisejících s autofagií a transkripčních faktorů souvisejících s adipogenezí byly analyzovány reverzní transkripčně-polymerázovou řetězovou reakcí v reálném čase a/nebo analýzou Western blot.Akumulace lipidových kapiček byla zkoumána barvením Oil Red O. Autofagické vakuoly byly hojnější v GO buňkách než v non-GO buňkách (p<0,05).Exprese genů souvisejících s autofagií byla významně vyšší v GO tkáních a buňkách než v jejich non-GO protějšcích.Interleukin-1p zvýšil LC3-II, p62 a Atg7 protein v GO buňkách.Akumulace autofagosomů byla prokázána 4. den adipogeneze a klesala 10. den spolu s tvorbou lipidových kapének.Exprese proteinů LC3 a p62 se zvýšila během 48 hodin po diferenciaci a postupně se snižovala od 4. do 10. dne. Léčba bafilomycinem A1 a knockdown Atg5 pomocí shRNA inhibovaly akumulaci lipidových kapének a potlačovaly expresi adipogenních markerů. Autofagie byla zvýšena v GO tkáni a buňkách ve srovnání s non-GO tkáně a buňky, což naznačuje, že autofagie hraje roli v patogenezi GO.Manipulace autofagie může být terapeutickým cílem pro GO.