produkty

Monogalaktopyranosidy fluoresceinu a methylester fluoresceinu: syntéza, enzymatická hydrolýza biotnylovanou β-galaktosidázou a stanovení translačního difúzního koeficientu

Fluoresceinové monoglykosidy (d-galaktopyranosid (FMG) a d-glukopyranosid) a jejich methylester (MFMG) byly připraveny z acetobromoglukózy/galaktózy a methylesteru fluoresceinu v dobrých výtěžcích.Byly provedeny experimenty enzymatické hydrolýzy (za použití biotinylované β-galaktosidázy) galaktoderivátů a byly vypočteny kinetické parametry.Během hydrolýzy bylo pozorováno 15–20násobné zvýšení intenzity fluorescence.V krátké době a nízké koncentraci substrátu bylo zaznamenáno lineární zvýšení fluorescence, což činí tyto sloučeniny užitečnými a citlivými sondami pro galaktosidázy.Velikost hodnoty Michaelis-Mentenovy konstanty (Km) pro MFMG je vyšší než u FMG, což naznačuje možnou konformační změnu fluorogenního substrátu.Hodnota Km pro biotinylovaný β-Gal s FMG je nižší než pro nativní enzym.Toto pozorování ukazuje na vyšší substrátovou afinitu biotinylovaného enzymu ve srovnání s nativním enzymem.Translační difúzní koeficienty byly měřeny jak pro fluorogenní substráty, tak pro oba produkty pomocí fluorescenční korelační spektroskopie.Translační difúzní koeficienty pro fluorogenní substráty a produkty enzymatické hydrolýzy byly naměřeny jako podobné, v rozmezí 3,5–4,5 × 10–10 m2 s−1.Zlepšení nebo zpomalení enzymatické kinetiky v důsledku rozdílu v translační mobilitě substrátu a produktu tedy není tak zřejmé.